Technique d’observation et d’analyse de la structure d’un échantillon pour sa reconstruction en 3D au cours de laquelle la surface de l’échantillon enrobé en résine est coupée par un ultramicrotome spécifique in-situ (dans la chambre du MEB) et la surface du bloc imagée en électrons rétrodiffusés à basse tension dans la foulée. En répétant l’opération automatiquement, on obtient une série d’images 2D du bloc. L’assemblage des images du stack 2D permet ensuite d’obtenir la visualisation 3D complète du bloc. Des extractions ultérieures de zones (par segmentation) ou d’objets d’intérêts (cellules, organelles, etc.) permet de révéler la structure 3D d’objets µmétriques contenus dans le volume acquis. Coupes et observations sont enchainées automatiquement grâce aux logiciels dédiés. Les coupes d’échantillons étant « sacrifiées », cette technique est destructive.
* Deerinck, T. J., Bushong, E., Thor, A. & Ellisman, M.H. NCMIR methods for 3D EM: A new protocol for preparation of biological specimens for serial block-face SEM. Microscopy (Oxf),6-8. (2010).
Workflow coupe et observation
